Método para la extracción de ADN cloroplastídico de Bouteloua gracilis como herramienta para aplicaciones moleculares

Method of chloroplast DNA extraction from Bouteloua gracilis as a tool for molecular applications

  • David I. Hernández-Quezada Universidad Autónoma de Chihuahua
  • Sigifredo Arévalo-Gallegos Universidad Autónoma de Chihuahua
  • Armando Aguado-Santacruz Instituto Nacional de Investigaciones Forestales, Agrícolas y Pecuarias
  • David A. Betancourt-Guerra Universidad Autónoma de Chihuahua
  • Tania Siquieros-Cendón Universidad Autónoma de Chihuahua
  • Blanca Rivera-Chavira Universidad Autónoma de Chihuahua
  • Guadalupe Virginia Nevárez-Moorillón Universidad Autónoma de Chihuahua
  • Quintín Rascón-Cruz Universidad Autónoma de Chihuahua
Palabras clave: Análisis molecular, clonación de genes, mapa genético, transferencia horizontal de genes

Resumen

La manipulación genética del genoma de cloroplasto esta a la vanguardia en investigación biotecnológica. El pasto B. gracilis es  un modelo para el estudio de estrés hídrico y oxidativo, capacidades relacionadas al cloroplasto. Es necesario tener un método que facilite  la obtención de ADN de buena calidad, particularmente cuando se refiere al ADN de cloroplasto de B. gracilis. La implementación de  un método para la extracción de cpADN se logró probando diferentes  estrategias de extracción de cpADN reportados en la literatura y  combinando las etapas más apropiadas para B. gracilis. La  incorporación de un paso adicional del lavado con CTAB permitió la   recuperación de cpDNA enriquecido, el cual se puede utilizar en el desarrollo de hermanitas moleculares. Debido la implementación de  un protocolo de extracción también fue posible obtener una cantidad  considerable de cpADN de B. gracilis. El cpADN fue digerido con  varias enzimas de restricción y los fragmentos resultantes fueron analizados por Southern blot con las sondas de los genes de rADN 16S y 23S. Abstract   Genetic manipulation of the chloroplast genome is at the forefront  of biotechnology research. B. gracilis is a model for the study  of water stress and oxidative capacities related to the  chloroplast. It is requires a method to facilitate the obtaining of  good quality DNA, particularly when it comes to chloroplast   DNA of B. gracilis. The implementation of a method for extracting  cpDNA was achieved by assaying different strategies cpDNA  extraction reported in the literature and combining the most  appropriate stage for B. gracilis for cpDNA extraction. The  incorporation of an additional step of washing with CTAB after  lysis of chloroplasts, allowed the recovery of enriched cpDNA which can be used in the development of molecular tools. Due  to the implementation of an extraction protocol was also possible   to obtain a considerable amount of B. gracilis cpDNA. The cpDNA  was digested with several restriction enzymes and the resulting  fragments were analyzed by Southern blot with probes of genes rADN 16S and 23S.
Publicado
2020-11-03
Cómo citar
Hernández-Quezada, D. I., Arévalo-Gallegos, S., Aguado-Santacruz, A., Betancourt-Guerra, D. A., Siquieros-Cendón, T., Rivera-Chavira, B., Nevárez-Moorillón, G. V., & Rascón-Cruz, Q. (2020). Método para la extracción de ADN cloroplastídico de Bouteloua gracilis como herramienta para aplicaciones moleculares : Method of chloroplast DNA extraction from Bouteloua gracilis as a tool for molecular applications . TECNOCIENCIA Chihuahua, 5(3), 132-139. Recuperado a partir de https://vocero.uach.mx/index.php/tecnociencia/article/view/691